植物怎么提纯实验报告（植物dna的提取与纯化实验报告）

叶绿体色素提取,分离及理化性质的鉴定实验报告

实验三叶绿体色素的提取分离与理化性质鉴定

一、实验目的

1、学会叶绿体色素提取和分离的方法。

2、了解叶绿体色素的荧光现象、皂化反应等理化性质。

二、实验原理

叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。

提取液可用色层分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。

叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。

三、实验器材

新鲜的植物叶片。

研钵；漏斗；100ml三角瓶；玻璃棒；剪刀；滴管；培养皿；定性滤纸条（5cm×1.5cm）。

毛细管；试管；试管架；石棉网；烧杯（100ml）；酒精灯；铁三角架；刻度吸量管2ml、5ml各1支。

四、实验试剂

1、95%乙醇；石英砂；碳酸钙粉

2、推动剂：按石油醚：丙酮：苯（10：2：1）比例配制（体积比）

3、醋酸铜粉末；5%的稀盐酸

4、甲醇、KOH

五、实验步骤

1．叶绿体色素的提取

（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4~5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。

（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2~3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml 95%乙醇，暗处放置3~5min，上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。

2. 叶绿体色素的分离

（1）取一块预先干燥处理过的定性滤纸，将它剪成长约10cm ，宽约1cm的滤纸条。

（2）用毛细管吸取色素提取液。在滤纸条的一端（约距这一端的1cm处）划出一条滤液细线，等滤液干燥后，再重复划4～5次。

（3）将滤纸条的另一端（约距这一端1cm处）折成“V”字形，并将它挂在放有层析液的烧杯壁上（注意：色素线要略高于层析液面，且滤纸条下端很好不要碰到烧杯壁），盖上培养皿。

3.叶绿体色素的性质鉴定

(1)荧光现象的观察

取1支20ml刻度试管加入5ml叶绿体色素乙醇提取液，在直射光下观察溶液的透射光与反射光颜色有何不同？解释原因。

(2)皂化作用（绿色素与黄色素的分离）

在做过荧光现象观察的叶绿体色素乙醇提取液试管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液，充分摇匀。片刻后，加入5ml苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入1～1.5ml蒸馏水，轻轻混匀（勿激烈摇荡），于试管架上静置分层。若溶液不分层，则用滴管吸取蒸馏水，沿管壁滴加，边滴加边摇动，直到溶液开始分层时，静置。可以看到溶液逐渐分为两层，下层是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的叶绿素a和b（以及少量的叶黄素）；上层是苯溶液，其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。

(3)H+和Cu++对叶绿素分子中Mg++的取代作用

取上述色素乙醇提取液少许于试管中，加入5%HCl数滴，摇匀，直至溶液出现褐绿色，当溶液变褐后，再加入少量醋酸铜粉末，微微加热，观察记载溶液颜色变化情况。

六、注意事项

1、为了避免叶绿素的光分解，操作应在弱光下进行。

2、研磨时间尽可能短些，以不超过两分钟为宜。

3、在低温下发生皂化反应的叶绿体色素溶液，易乳化而出现白絮状物，溶液浑浊，且不分层。可激烈摇匀，放在30～40℃的水浴中加热，溶液很快分层，絮状物消失，溶液变得清澈透明。

七、实验报告

1、将纸层析法分离叶绿体色素的实验结果贴在实验报告纸上，并给予分析。

《你看着少抄点》

绿叶中色素的提取和分离的实验报告.是照你的答案直接抄下去呢还是只是那个步骤啊？详细点行吗！拜托拉！

活动目标

1．进行绿叶中色素的提取和分离的实验。

2．探究绿叶中含有几种色素。

实验原理

光合色素易溶于无水乙醇等有机溶剂中，可以用无水乙醇提取绿叶中的光合色素。

光合色素可溶于层析液中，不同的光合色素在层析液中的溶解度不同。溶解度高的光合色素随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的光合色素在滤纸上扩散得慢。这样，很终不同的光合色素会在扩散过程中分离开来。

操作指南

1．材料新鲜的绿色叶片（如菠菜叶，南方学校也可尝试用朱槿叶）

2．用具定性滤纸，棉塞，试管，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，天平，10 mL量筒。

3．试剂及其他药品无水乙醇，层析液，二氧化硅，碳酸钙。

4．操作要点

（1）提取光合色素

用天平称取5 g绿色叶片，剪碎，放入研钵中。向研钵中放入少量二氧化硅和碳酸钙，加入10 mL无水乙醇，迅速、充分地研磨。在玻璃漏斗基部放一块单层尼龙布，将漏斗插入试管。将研磨液倒入漏斗，及时用棉塞塞严盛有滤液的试管。

（2）制备滤纸条

将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条，将滤纸条一端剪去两角，在此端距顶端1 cm处用铅笔画一条细横线。

（3）画滤液细线

用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画细线。待滤液线干后，重复画线一两次。

（4）分离光合色素

将适量的层析液倒入试管，将滤纸条画线一端朝下，轻轻插入层析液中，迅速塞紧试管口。（注意：不要让层析液触及滤液线。）

（5）观察、记录

待层析液上缘扩散至接近滤纸条顶端时，将滤纸条取出，风干。观察滤纸条上所出现的色素带及其颜色，并做好记录。

5．需要注意的几个问题

（1）应选择绿色较深、光合色素含量较高的植物叶片，如菠菜叶、朱槿叶等，作为实验材料，以便使滤液中色素浓度较高。

（2）画滤液细线时，要迅速，并要等滤液接近干时，再重复画线，以防滤液扩散开使滤液线过宽，影响分离效果。

（3）将滤纸条插入层析液中时，要避免滤液细线直接触及层析液。试管中的层析液高度不要接近或超过滤液细线所处的高度，可灵活把握层析液的用量。

教学设计

1．创设情境

植物可以进行光合作用。植物体所有部位的细胞都可以进行光合作用吗？

绿色的叶片可以进行光合作用，而植物体的非绿色部位（如根）的细胞不能进行光合作用。

引出光合作用的必要条件之一──光合色素。

2．提出问题

绿色的植物细胞中参与光合作用的色素有几种？

3．原理介绍

参见本实验的实验原理。

4．学生了解实验步骤

学生分小组阅读、讨论实验操作步骤，并提出他们所困惑的问题。

教师组织学生讨论问题并解决问题。

5．实验操作过程

略

6．观察和分析结果

观察滤纸条上色素带的数量、颜色、排列顺序。

7．得出结论

使学生明确光合色素的种类。

8．引导学生填写实验报告

评价建议

本实验可重点针对学生实验操作的规范性、准确性，以及实验结果的好坏做出评价。

替代方案

实验名称：绿色植物光合色素的分离

实验目的：

1．尝试用纸层析法分离绿色植物的光合色素。

2．探索绿色植物光合色素的种类。

实验原理：（同原实验）

材料：新鲜的绿色叶片（如菠菜叶、朱槿叶等）

用具：吸水纸，定性滤纸，小烧杯，培养皿盖，垫板，硬币，量筒。

试剂：层析液

操作要点：

1．制备滤纸条

取干燥的定性滤纸，剪成长6 cm左右、宽1 cm左右的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1 cm处用铅笔画一条细横线。

2．获取色素线

（1）取一片新鲜的绿色叶片。

（2）将垫板放在实验台上，把吸水纸铺在垫板上，将制备好的滤纸条放在吸水纸上。

（3）把叶片放在滤纸条上，用硬币的侧缘对准滤纸条上的铅笔细线滚压叶片，反复多次，直到在滤纸条上出现一条深绿色的色素线。

3．分离光合色素

将3 mL层析液倒入小烧杯，将滤纸条有色素线的一端向下，轻轻插入层析液中。不要让色素线浸入层析液中，不要让滤纸条贴在烧杯壁上。用培养皿盖盖在烧杯上。

4．观察结果

10 min左右取出滤纸条。待其干燥后，观察分离出的色素带有几条，分别呈什么颜色，并做好记录。

叶绿素提取实验报告，有谁知道？紧急！！！

实验三：叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定

（一）实验目的及意义

（二）实验原理

（三）实验步骤

（四）实验报告

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实验目的和意义

因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用

绿色植物的光合作用是在叶绿体中的叶绿体色素中进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。

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叶绿体在细胞中运动视频

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叶绿体在细胞中的分布与结构

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类囊体膜的结构及功能

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实验原理

植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质。它一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。

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实验原理

叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。

色素分离的方法有多种，纸层析是很简便的一种。当溶剂（有机推动剂）不断从纸上流过时，由于混合物（叶绿素提取液）中各种成分在固定相（滤纸纤维素所吸附的水分）和流动相（有机推动剂）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。

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实验原理

叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。

叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。

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实验步骤(1)

今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度D，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。

Ca=12.7D663 –2.69 D645（3）

Cb=22.9 D645 –4.68D663（4）

Ck=4.7D440- 0.27Ca+b

根据朗伯一比尔定律，某有色溶液的吸光度D与其中溶液浓度C和液层厚度L成正比，即：

D＝KCL

D：吸光度，即吸收光的量，C：溶液浓度, K：为比吸收系数（吸光系数）， L：液层厚度，通常为1cm.

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。

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实验材料和器材

器材：721型分光光度计、电子天平、量筒、研钵、剪刀、漏斗、滤纸、移液管（1mL）、试管及试管架、洗耳球、酒精灯等。

试剂：丙酮、80%丙酮、醋酸酮、5%盐酸、碳酸钙、石英砂等

实验材料

卤地菊叶片

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实验步骤(1)

分离：在大试管中加入推动剂，然后将滤纸固定于胶塞的小钩上，插入试管中，使尖端浸入溶剂内（色点要高于叶面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧胶塞，直立于阴暗处层析。

当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，观察色带的分布。叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。

1.叶绿体色素的提取

（1）取植物新鲜叶片1克，洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放人研钵中。

（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，2-3 mL95%乙醇，研磨至糊状，再加2-3 mL95％乙醇，过滤，即得色素提取液。

2.叶绿体色素的分离

点样：取前端剪成三角形的滤纸条，用毛细管取叶绿素提取液，如图点样于“色点”处，注意每次所点溶液不可过多，点样后晾干，再重复操作数次。

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理化性质测定

2.氢和铜对叶绿素分子中镁的取代作用

方法一；取两支试管。*一支试管加叶绿体色素提取液2mL，作为对照。第二支试管加叶绿体色素提取液2 mL，再加入稀盐酸1滴，摇匀，观察溶液颜色变化。当溶液变竭后，再加入少量醋酸铜粉末，微微加热，观察记录溶液颜色变化情况，并与对照试管相比较。解释其颜色变化原因。

将上一个实验中提取的叶绿体色素溶液适当稀释后，进行以下实验：

1.荧光现象的观察。

取l支试管加入浓的叶绿体色素提取液，在直射光下观察溶液的透射光与反射光颜色有何不同，可观察到反射出暗红色的荧光。

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理化性质测定

2.氢和铜对叶绿素分子中镁的取代作用

将上一个实验中提取的叶绿体色素溶液适当稀释后，进行以下实验：

1.荧光现象的观察。

取l支试管加入浓的叶绿体色素提取液，在直射光下观察溶液的透射光与反射光颜色有何不同，可观察到反射出暗红色的荧光。

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理化性质测定

4. 叶绿体色素吸收光谱曲线

将上述叶绿体色素提取液注入1cm比色杯中，另取95%乙醇作空白，于400-700nm之间，每间隔10nm读取光密度值。根据测定结果，以波长为横坐标绘制曲线，此即叶绿体色素的吸收光谱曲线。用同样的方法测定皂化作用中分离出绿色素与黄色素的吸收光谱曲线，并对结果进行分析。

3.皂化作用（绿色素与黄色素的分离）

取叶绿体色素提取液2 mL于大试管中，加入4mL乙醚，摇匀，再沿试管壁慢慢加人3～6mL蒸馏水，轻轻混匀，静置片刻，溶液即分为两层，色素已全部转入上层乙醚中。用滴管吸取上层绿色层溶液，放入另一试管中，再用蒸馏水冲洗一、二次。在色素乙醚溶液中加入30％KOH－甲醇溶液，充分摇匀，再加入蒸馏水约3 mL，摇匀静置。可以看到溶液逐渐分为两层，下层是水溶液，其中溶有皂化的叶绿素a和b，上层是乙醚溶液，其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。将上下层放入两试管中，可供观察吸收光谱用。

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含量测定

(3）转移到25mL棕色容量瓶中，用少量80％丙酮冲洗研钵、研棒及残渣数次，很后连同残渣一起倒入容量瓶中。很后用80％丙酮定容至25mL，摇匀。离心或过滤。

(4）将上述色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以80％丙酮为空白，在波长663nm、645nm、652nm和440nm下测定光密度。

（1）取新鲜植物叶片，擦净组织表面污物，剪碎，混匀。

（2）称取剪碎的新鲜样品0.5g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3mL80％丙酮，研成匀浆，再加80％丙酮5mL，继续研磨至组织变白。

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四、实验结果计算

将测得的光密度值代入公式，分别计算叶绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度（mg／L）。

并按下式计算组织中单位鲜重或干重的各色素的含量：

色素浓度（mg／L）×提取液总体积×稀释倍数

色素在叶片中的含量（%）= ×100% 样品重量（mg）×1000